hela细胞培养过程中飘浮多如何解决？

我们培养的hela细胞 贴壁挺多的，细胞形态也有，但是有很多的死细胞飘浮，这是什么原因呢？该如何操作去解决这个问题呢？

当我们进行细胞培养时，总会碰到各种各样的问题，其中，细胞漂浮就很常见，这究竟是怎么引起的呢，我们又该如何解决，今天就和大家唠一唠。

01.细胞污染

我们肉眼观察细胞培养基是否澄清，在显微镜下观察细胞有无污染，细胞污染也可能导致细胞脱落和漂浮。当发现污染时要及时采取相应措施进行处理，在日常的细胞培养过程中严格采取无菌技术操作规范，注意消毒和清洁，避免细菌和真菌等微生物污染。

02.细胞冻存、复苏操作不当

细胞冻存和复苏非常关键，细胞冻存不好会导致复苏后细胞数量减少、活力不佳、细胞状态不好甚至死亡。在进行细胞冻存和复苏时要严格遵循“慢冻快融”原则，如果条件允许，建议使用不含DMSO的细胞冻存液，DMSO对细胞有一定毒性，可能会影响细胞生长和粘附。

03.细胞密度过高或过低

细胞接种或生长密度过高会使得细胞间竞争生存空间和营养，导致细胞脱落和漂浮；接种密度过低会延长生长周期，细胞边养边漂。建议接种合适密度的细胞，在细胞密度达到80%时及时进行传代，从而避免细胞密度过高。

04.培养操作问题

在进行细胞传代、冻存、复苏操作时，要注意无菌操作，保持无菌状态，避免细胞重悬吹打次数过多、力度过大，或者过度消化细胞导致细胞状态不好，碎片增多甚至死亡漂浮。频繁换液或清洗细胞也会导致细胞状态变差，建议换液时间间隔为2-3天。拿取细胞时注意轻拿轻放，避免激烈晃动或震动培养瓶/皿/板。

05.细胞粘附能力差

有些细胞粘附能力较弱，贴壁不牢靠，如果培养瓶或培养皿表面处理不好，可能导致细胞脱落和漂浮。可以尝试用多聚赖氨酸包被培养器皿，以增加细胞贴壁牢固度，或者接种时减少培养基量以加快细胞贴壁速度，待细胞贴壁后再补加培养基至正常用量。

06.细胞状态不好

每天观察细胞的形态和状态是否正常，培养背景是否清晰干净，细胞生长速度是否正常。细胞状态不好时可通过提高血清比例、稳定培养环境等方法进行改善。不要频繁更换培养基种类，当更换新的培养基后细胞不适应，应及时更换为原培养基或与原培养基按一定比例混合后使用，让细胞慢慢适应，再过渡到新的培养基。

07.培养条件不稳定

细胞培养基不新鲜、pH变化大，血清质量不好，二氧化碳浓度不对等都可能会影响细胞的贴壁和生长。

● 建议培养基按需进行分装配制，尽快使用。

● 当使用的培养基pH变化明显，可更换含HEPES的培养基进行培养。

● 建议使用品种稳定、同一批次的血清，如果更换血清，需与原血清比例混合后使用，使细胞度过过渡期。

● 当使用碳酸氢钠含量不同的培养基时，应根据培养基中碳酸氢钠的含量调节不同的二氧化碳浓度进行培养。