细胞凋亡检测

细胞凋亡是细胞对环境的生理性或病理性刺激信号、环境条件的变化或缓和性损伤产生的应答有序变化的死亡过程，是一种基本的细胞生物学现象，在多细胞生物中起着去除不需要细胞或异常细胞的作用。研究细胞凋亡可以了解疾病发生机制，对临床诊疗、新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗以及从促凋亡角度探索肿瘤的基因治疗等方面都起到十分重要的作用。

ANNEXIN V-PI法

磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine,PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin V是一种分子量为35～36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin V进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。碘化丙锭（propidine iodide,Pl）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。

TUNEL法

即DNA片段化和形态学检测，是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确地反映细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征。脱氧核糖核苷酸衍生物地高辛在TdT酶的作用下，可以掺入到凋亡细胞双链或单链DNA的3'-OH末端，与dATP形成异多聚体，并可与连接了报告酶（过氧化物酶或碱性磷酸酶）的抗地高辛抗体结合。在适合底物存在下，过氧化物酶可产生很强的颜色反应，特异准确地定位出正在凋亡的细胞。

Caspase系列活性检测

Caspase是一个蛋白酶家族，活化的Caspase会破坏一些重要的胞内蛋白从而引起凋亡的发生。Caspase通常以无活性的酶原形式存在于细胞质中，多种因素会激活Caspase的活性，一旦某个Caspase酶被激活后，会激活一系列其它的Caspase酶。将Caspases序列特异性的多肽偶联至黄色基团pNA作为底物，一旦Caspase被活化，底物被活化的Caspase剪切，黄色基团会游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm或400nm）测定其吸光值。