HEK293细胞无血清培养基系列

【产品名称】  通用型HEK293细胞无血清培养基

【产品特点】

◆无血清，不含动物源成分，化学成分确定；

◆广泛用于各种用途的HEK293高密度培养及高效率转染；

◆可用于病毒包装以及高效表达蛋白；

◆易于放大规模培养，性能稳定，批间差异小；

◆注射用水配制，通过0.1μm滤膜过滤除菌，低内毒素、无污染。

◆外 观：澄清透明液体

◆pH值：7.2 - 7.4

◆渗透压：270 - 310 mOsm/kg·H2O

◆内毒素：≤1 EU/mL

◆微生物检测：阴性

【使用方法】

一、293细胞的扩增培养

1. 离心收集细胞（100×g，5~10分钟）；

2. 使用少量预热培养基重悬细胞，进行细胞计数，确定细胞活率，计算活细胞密度；

3. 将悬浮293细胞以0.2-0.6×106 cells/mL的密度接种于125mL摇瓶内，培养体系为20-30mL；

4. 摇床转速设置为120~140 rpm，进行细胞培养；

5. 当活细胞密度达到2×106个/mL时，可以进行传代。

注：大多数细胞株可直接使用本产品传代三次以上即可完成驯化。但对有些细胞株，使用本产品时可能要采用梯度连续驯化。

二、293细胞的冻存

1. 准备程序降温盒、冻存管等所需材料置于4℃冰箱中预冷， 配制冻存液：80% 293培养基+20%二甲基亚砜（DMSO）混合液，2~8℃预冷;

2. 取处于对数生长期，密度大于1.5×106cells/mL，活率大于95%的细胞进行冻存，一般建议冻存密度为1.0~1.5×107cells/mL；

3. 800 rpm（150 g）离心5min，收集细胞；

4. 弃上清液，使用冻存液重新悬浮细胞，冻存密度1.0~1.5×107cells/mL，将细胞转移至无菌冻存管中；

5. 将冻存管转移至预冷的程序降温盒中，-80℃过夜，再转移至液氮罐中长期贮存。

三、293细胞的复苏

1. 准备15ml无菌离心管，加入2~5mL的293细胞培养基；

2. 从液氮罐中取出冻存细胞，迅速在37℃水浴锅中将细胞融化；

3. 用75%的乙醇擦拭冻存管后，在无菌操作台中打开冻存管，将细胞悬液转移至15ml离心管中，800rpm离心5min；

4. 弃上清，使用2~3ml预热培养基重新悬浮，转移至125ml摇瓶中；

5. 将摇瓶放置于37℃，8%CO2，110~130 rpm的摇床中培养；

6. 培养3-5天后，对细胞进行计数传代。推荐以3×105个/mL 的活细胞密度进行传代，传代3次后再进行相关细胞实验。

四、293细胞的转染

1. 取指数生长期内的细胞，以1.0×106cells/ml左右的初始密度接种，48 h后密度可达到3-4×106cells/ml，活率应大于90%。

2. 按照优化后的瞬转工艺，制备质粒和转染试剂混合液。

3. 将质粒-转染试剂混合物加入悬浮293细胞培养液中，放入培养箱中培养。

4. 第七天或活率低于50%时可进行转染效率检测、收获蛋白或病毒等操作。

【注意事项】

◆收货后尽快放入保存温度，避免长时间常温保存。

◆本产品经过滤除菌，使用时应注意无菌操作，避免污染。

◆使用时需要额外添加4-6mM L-谷氨酰胺。

◆由于谷氨酰胺易降解，可每次使用培养基时加入谷氨酰胺，或者分装部分培养基添加谷氨酰胺后一周内使用。

注：具体相关技术参数，视实验体系而定。

【名称/包装规格/与存储】

HEK293细胞无血清培养基     D-H01     500mL/瓶          2-8℃避光        12个月

【生产企业】

安徽浙卫康医疗科技有限公司

网址：www.izwk.com.cn

电话：0551-62671535

地址：合肥市国家级经济开发区蜀山产业园沁源路666号