人间充质干细胞成骨诱导分化培养基

人间充质干细胞成骨诱导分化培养基说明书

【产品名称】人间充质干细胞成骨诱导分化培养基

【包装规格】 200mL/Kit

【产品参数】

◆pH值：7.2 - 7.4

◆内毒素：≤1 EU/mL

◆渗透压：280 - 320 mOsm/kg·H2O

◆生物安全：细菌、真菌、支原体检测阴性

◆质量检测：成骨诱导分化能力测试合格

【产品简介】

人间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒具有高效成骨定向分化能力，诱导分化时间短，诱导分化效率高，可用于多种来源的人间充质干细胞成骨诱导分化。

【产品组成】

         产品信息                    货号           规格              保存条件     有效期

成骨诱导分化基础培养基     D-Y01A     175mL              2-8°C，避光      1年

成骨诱导分化添加物            D-Y01B      25mL             -20°C，避光       1年

茜素红染色液                      D-Y01C      10mL              2-8°C，避光      1年

*将基础培养基和添加物混匀配制成成骨诱导分化完全培养基，置于2-8°C中避光保存，2周内使用完。

【使用方法】

1 准备间充质干细胞

取对数生长期的间充质干细胞， 按 2.0×104cells/cm2 的细胞密度接种至6孔板中（*建议预先用0.1%明胶对6孔板培养底面进行包被），于 37℃，5% CO2 培养箱中培养至汇合度达 70%-80% 左右，吸弃上清，加入成骨诱导分化完全培养基。

2 成骨诱导分化

将加有成骨诱导分化完全培养基的间充质干细胞置于 37℃，5% CO2 培养箱中培养，每3天换液一次，每次2mL/孔，连续诱导14-28天，待出现大量钙盐沉积，明显的钙结节时结束诱导，准备染色。

3 染色鉴定

3.1 固定，吸弃成骨诱导分化完全培养基，PBS轻柔清洗2次，吸弃PBS后取适量 4%中性多聚甲醛固定液覆盖6孔板底面，室温固定 30min，吸弃固定液后用ddH2O清洗3次。

3.2 染色，加入适量茜素红工作液，室温避光染色15-30min（根据钙盐含量适度调整染色时间），吸弃染色液后用ddH2O清洗3-5次，再加入适量ddH2O浸润避免细胞干燥。

4 成骨诱导分化能力评估

将6孔板置于显微镜下观察成骨染色效果，进行图像采集和成骨诱导分化能力评估。成骨诱导分化成功时，沉积的钙（钙盐和钙结节）与茜素红染料发生显色反应后呈现深红色或棕红色。

*间充质干细胞的成骨分化水平因细胞来源，培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。