干细胞成脂诱导分化培养基

人间充质干细胞成脂诱导分化培养基说明书

【产品名称】人间充质干细胞成脂诱导分化培养基

【包装规格】200mL/Kit

【产品参数】

◆pH值：7.2 - 7.4

◆内毒素：≤1 EU/mL

◆渗透压：280 - 320 mOsm/kg·H2O

◆生物安全：细菌、真菌、支原体检测阴性

◆质量检测：成脂诱导分化能力测试合格

【产品简介】人间充质干细胞成脂诱导分化试剂盒具有高效成脂定向分化能力，诱导分化时间短，诱导分化效率高，可用于多种来源的人间充质干细胞成脂诱导分化。

【产品组成】

                产品信息                        货号               规格                保存条件             有效期

成脂诱导分化基础培养基                D-Y02A            175mL            2-8°C，避光            1年

成脂诱导分化添加物                      D-Y02B              25mL            -20°C，避光            1年

油红O染色液（储液）                    D-Y02C              10mL            2-8°C，避光            1年

*将基础培养基和添加物混匀配制成成脂诱导分化完全培养基，置于2-8°C中避光保存，2周内使用完。

【使用方法】

1 准备间充质干细胞

取对数生长期的间充质干细胞， 按 2.0×104cells/cm2 的细胞密度接种至6孔板中（*建议预先用0.1%明胶对6孔板培养底面进行包被），于 37℃，5% CO2 培养箱中培养至汇合度达 90~100%，吸弃上清，加入成脂诱导分化完全培养基。

2 成脂诱导分化

将加有成脂诱导分化完全培养基的间充质干细胞置于 37℃，5% CO2 培养箱中培养，每3天换液一次，每次2mL/孔，连续诱导14-21天，观察诱导形成的脂滴数量和大小，待出现足量，大小适宜的脂滴时结束诱导，准备染色。

3 染色鉴定

3.1 配制油红O工作液，按油红O储液：蒸馏水 = 3 : 2 比例稀释，1000rpm，3min常温离心，取上清液即为油红O工作液（*工作液根据需要，现配现用）。

3.2 固定，吸弃成脂诱导分化完全培养基，PBS清洗1次，吸弃PBS后取适量 4%中性多聚甲醛固定液覆盖6孔板底面，室温固定 30min，吸弃固定液后用PBS清洗2次。

3.2 染色，加入适量油红O工作液，室温避光染色30min，吸弃染色液后用PBS清洗2次，再加入适量PBS浸润避免细胞干燥。

4 成脂诱导分化能力评估

将6孔板置于显微镜下观察成脂染色效果，进行图像采集和成脂诱导分化能力评估。成脂诱导分化成功时，脂滴与油红O染料结合后呈现红色或橘红色。

*间充质干细胞的成脂分化水平因细胞来源，培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。